पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया(आरएससी) एक जटिल दो चरण वाली सीरोलॉजिकल प्रतिक्रिया है। यह पांच सामग्रियों का उपयोग करता है जो दो सिस्टम बनाते हैं: एंटीजन, एंटीबॉडी, पूरक (पहला सिस्टम); भेड़ एरिथ्रोसाइट्स, हेमोलिटिक सीरम के साथ संवेदनशील (उपचारित) जिसमें उनके लिए विशिष्ट एंटीबॉडी होते हैं (दूसरा, या संकेतक, हीम प्रणाली)। इस मामले में, प्रतिक्रिया के पहले चरण में एंटीजन के साथ एंटीबॉडी की बातचीत से एक प्रतिरक्षा परिसर का निर्माण होता है जो पूरक को सोख लेता है, लेकिन इसे दृष्टिगत रूप से पता नहीं लगाया जा सकता है। दूसरे चरण में, हीम प्रणाली का उपयोग एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स पर पूरक निर्धारण के संकेतक के रूप में किया जाता है, जो एक प्रतिरक्षा कॉम्प्लेक्स होने के कारण इसे अवशोषित करने में भी सक्षम है। अंततः, प्रतिक्रिया के दो संभावित परिणाम हैं। यदि एंटीबॉडी और एंटीजन एक-दूसरे से मेल खाते हैं और पूरक को परिणामी कॉम्प्लेक्स द्वारा सोख लिया जाता है, तो हीम प्रणाली के एरिथ्रोसाइट्स का विश्लेषण नहीं होगा। यदि एंटीबॉडी एंटीजन से मेल नहीं खाता है, और इसके विपरीत, पूरक, मुक्त रहकर, हीम प्रणाली में शामिल हो जाएगा और हेमोलिसिस का कारण बनेगा।

अन्य सीरोलॉजिकल परीक्षणों की तरह, आरएसए का उपयोग किसी ज्ञात एंटीजन से विशिष्ट एंटीबॉडी का पता लगाने या ज्ञात एंटीबॉडी से एंटीजन का पता लगाने के लिए किया जा सकता है।

सामान्य विशेषताएँआरएसके सामग्री.

1. प्रतिक्रिया करने से पहले, परीक्षण किए जा रहे सीरम को अपने स्वयं के पूरक को निष्क्रिय करने के लिए पानी के स्नान में 30 मिनट तक गर्म किया जाता है और 1:5 से शुरू करके पतला किया जाता है।

2. एंटीजीन बैक्टीरिया कल्चर, उनके लाइसेट्स, वायरस और वायरस युक्त सामग्री, पैथोलॉजिकल रूप से परिवर्तित अंगों के अर्क और ऊतक लिपिड हो सकते हैं।

3. पूरक - प्रयोग के दिन प्राप्त गिनी पिग सीरम। वर्तमान में, औद्योगिक शुष्क पूरक का उपयोग किया जाता है।

4. हेमोलिटिक प्रणाली में हेमोलिटिक सीरम और भेड़ की लाल रक्त कोशिकाओं का 3% निलंबन समान मात्रा में मिश्रित होता है। हेमोलिसिन के साथ एरिथ्रोसाइट्स को संवेदनशील बनाने के लिए, मिश्रण को 30 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर थर्मोस्टेट में रखा जाता है।

आरएससी का मुख्य प्रयोग स्थापित करना।सीरम, एंटीजन और पूरक को 1 ट्यूब में जोड़ा जाता है, सीरम, पूरक और एंटीजन के बजाय एक आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान (सीरम नियंत्रण) को दूसरी ट्यूब में जोड़ा जाता है, एंटीजन, पूरक और उसी सोडियम क्लोराइड समाधान को तीसरी ट्यूब में जोड़ा जाता है ( एंटीजन नियंत्रण)। टेस्ट ट्यूब को 1 घंटे के लिए 37°C के तापमान पर थर्मोस्टेट में रखा जाता है। उसी समय, एक हेमोलिटिक सिस्टम तैयार किया जाता है, जिसे थर्मोस्टेट से रैक को हटाने के बाद तीनों ट्यूबों में जोड़ा जाता है। मणि प्रणाली को तीन परीक्षण ट्यूबों की सामग्री के साथ मिश्रित करने के बाद, बाद वाले को फिर से 1 घंटे के लिए थर्मोस्टेट में रखा जाता है, और इस समय के बाद आरएसके के परिणामों को ध्यान में रखा जाता है।

आरएससी को ध्यान में रखते समय, प्रतिक्रिया की तीव्रता प्लसस द्वारा इंगित की जाती है: "++++" - तेजी से सकारात्मक प्रतिक्रियाहेमोलिसिस की पूरी देरी के साथ, टेस्ट ट्यूब में तरल रंगहीन होता है, सभी लाल रक्त कोशिकाएं नीचे तक बस जाती हैं; "+++", "++" - सकारात्मक प्रतिक्रिया, हेमोलिसिस के कारण तरल के रंग में वृद्धि और तलछट में लाल रक्त कोशिकाओं की संख्या में कमी की विशेषता; "+" - कमजोर सकारात्मक प्रतिक्रिया, तरल तीव्र रंग का होता है, ट्यूब के नीचे थोड़ी मात्रा में लाल रक्त कोशिकाएं होती हैं। एक नकारात्मक प्रतिक्रिया को "-" चिन्ह द्वारा दर्शाया जाता है, जिसमें पूर्ण हेमोलिसिस देखा जाता है, टेस्ट ट्यूब में तरल का रंग गहरा गुलाबी होता है ("लाह रक्त")।

आरएससी एक बहुत ही जटिल, लेकिन बहुत संवेदनशील विशिष्ट प्रतिक्रिया है। सिफलिस के निदान में व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है, जीर्ण रूपसूजाक, काली खांसी, एक्टिनोमाइकोसिस, सभी रिकेट्सियोसिस और विषाणु संक्रमण.

लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परख.

यह विधि 70 के दशक की शुरुआत में वैज्ञानिकों के तीन समूहों द्वारा एक-दूसरे से स्वतंत्र रूप से विकसित की गई थी। यह विधि आरआईए के समान है, लेकिन यह एजी या एबी को लेबल करने पर आधारित है जो एक एंजाइम के साथ प्रतिक्रिया में प्रवेश करती है। सब्सट्रेट के साथ लेबल की गति आमतौर पर माध्यम के रंग में बदलाव के साथ होती है। वर्तमान में, इस पद्धति के कई संशोधन तैयार किए गए हैं, लेकिन सबसे व्यापक रूप से उपयोग किया जाने वाला विषम ठोस चरण एलिसा (ठोस चरण) है। वहाँ हैं:

1) प्रत्यक्ष ठोस चरण एलिसा। इस मामले में:

1. एबी के साथ सीरम को एक ठोस सब्सट्रेट पर तय किए गए एजी के साथ इनक्यूबेट किया जाता है (अक्सर यह एक प्लास्टिक माइक्रोप्लेट होता है)।

2. जिन एब्स में एजी नहीं बंधा है उन्हें बार-बार धोने से हटा दिया जाता है।

3. एंजाइम-लेबल सीरम को एब्स में जोड़ा जाता है जो एजी को बांधता है।

4. At से बंधे मार्कर एंजाइमों की संख्या निर्धारित करें।

2) प्रतिस्पर्धी ठोस-चरण एलिसा।

1. मट्ठा डालें. यदि इसमें विशिष्ट एब्स होते हैं, तो वे एक ठोस सब्सट्रेट पर तय एग्स से बंध जाते हैं। यदि कोई विशिष्ट एब्स नहीं हैं, तो एजी अनबाउंड दिखाई देता है।

2. एक निश्चित एजी के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी जोड़ते समय, पहले मामले में उनके पास बातचीत करने के लिए कुछ भी नहीं होगा (अधिकांश एजी पहले से ही बंधे हुए हैं) Þ मार्कर सामग्री कम है। दूसरे मामले में, विशिष्ट एब्स एजी से बंध जाएंगे और धोने के दौरान उन्हें धोया नहीं जाएगा Þ उच्च मार्कर सामग्री।

एम.बी. के समान एंटीबॉडीज़ निश्चित होती हैं, और विभिन्न कंपनियाँ पहले से ही निश्चित एंटीबॉडीज़ वाली गोलियाँ बनाती हैं।

एजी का पता लगाने के लिए शास्त्रीय तरीकों की तुलना में, यह विधि आपको एब के साथ उनकी बातचीत को सीधे रिकॉर्ड करने की अनुमति देती है, न कि माध्यमिक अभिव्यक्तियों (एग्लूटिनेशन, अवक्षेपण या हेमोलिसिस) को। विधि बहुत संवेदनशील है (1ng/ml की सांद्रता पर्याप्त है)।

निर्धारित करें: क्लैमाइडिया, क्लॉस्ट्रिडिया, एचआईवी, आदि।

8. फागोसाइटोसिस प्रतिक्रिया।

फागोसाइटोसिस माइक्रोफेज और मैक्रोफेज द्वारा किया जाता है। फागोसाइटोसिस के चरण: दृष्टिकोण, आसंजन, विसर्जन, पाचन।

फागोसाइटिक कोशिकाओं की कार्यात्मक गतिविधि का आकलन।

मात्रा ग्रैन्यूलोसाइट्स और मोनोसाइट्स की फागोसाइटिक गतिविधि का मूल्यांकन किया जाता है सारा खून, ल्यूकोसाइट निलंबन में या फ़ैगोसाइटिक कोशिकाओं के समृद्ध अंशों में। 1.0-2.0 माइक्रोन के व्यास वाले मोनोडिस्पर्स लेटेक्स कण, गर्मी से मारे गए बैक्टीरिया या खमीर जैसी कवक का निलंबन फागोसाइटोसिस की मानक वस्तुओं के रूप में उपयोग किया जाता है।

फागोसाइट्स को 1:10 या 1:100 के अनुपात में फागोसाइटोज्ड सामग्री के साथ मिलाया जाता है और लगातार हिलाते हुए 30 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया जाता है। फिर ट्यूबों को सेंट्रीफ्यूज किया जाता है और स्मीयर तैयार करने के लिए तलछट को रक्त सीरम की एक बूंद में फिर से निलंबित कर दिया जाता है। मे-क्रुनवाल्ड दाग के साथ तय किए गए और रोमानोव्स्की-गिम्सा के अनुसार दाग वाले स्मीयरों में, फागोसाइटिक कोशिकाओं का प्रतिशत (एफपी - फागोसाइटिक संकेतक) और प्रति 1 सेल में अवशोषित कणों की संख्या (पीएफ - फागोसाइटिक संख्या) की गणना की जाती है।

यू स्वस्थ व्यक्तिएफपी=40-80%, एफपी=1-5.

9. डायग्नोस्टिकम।

डायग्नोस्टिकम प्रति इकाई आयतन में ज्ञात कोशिका सामग्री के साथ गर्मी या फॉर्मेलिन द्वारा मारे गए कुछ माइक्रोबियल कोशिकाओं का निलंबन है। जीवित जीवाणुओं के निलंबन का उपयोग प्रतिजन के रूप में भी किया जा सकता है। प्रतिक्रिया घटना दो घंटे (37 0 सी पर) के बाद प्रारंभिक दिखाई देती है, अंतिम परिणाम 18-20 घंटों के बाद कमरे के तापमान पर ध्यान में रखा जाता है। निदान के लिए, एक सकारात्मक प्रतिक्रिया केवल एक निश्चित सीरम टिटर में रुचि रखती है, जो निदान के रूप में कार्य करती है। इस प्रकार, ब्रुसेलोसिस के लिए डायग्नोस्टिक टिटर 1:200 है, और तुला-रेमिया के लिए -1:100 है। एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए, आप एक्सप्रेस एग्लूटिनेशन परीक्षण कर सकते हैं (लेखा समय कई मिनट है)। उदाहरण के लिए: 1. टुलारेमिया में रक्त-बूंद प्रतिक्रिया। एक विशेष गिलास पर रोगी के पूरे रक्त की एक बूंद पर आसुत जल की एक बूंद (हेमोलिसिस के लिए) और टुलारेमिया डायग्नोस्टिकम की एक बूंद लगाई जाती है। प्रतिक्रिया 1-2 मिनट के भीतर होती है, एग्लूटीनेट्स सफेद गांठों के रूप में स्पष्ट रूप से दिखाई देते हैं। 2. ब्रुसेलोसिस के लिए कांच पर एक एक्सप्रेस हेडेलसन एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया की जाती है।

ये प्रतिक्रियाएं सीरम में एंटीबॉडी की मात्रा निर्धारित करने की अनुमति नहीं देती हैं। बी) पहचान के लिए शुद्ध संस्कृतिसंक्रामक रोगों के प्रेरक एजेंट। इस प्रयोजन के लिए, प्रतिरक्षा निदान परीक्षणों का उपयोग किया जाता है।

संपूर्ण माइक्रोबियल कोशिकाओं के साथ जानवरों को प्रतिरक्षित करके वैक्सीन और सीरम संस्थानों द्वारा उत्पादित एग्लूटिनेटिंग सीरा। सीरम की प्रामाणिकता सुनिश्चित करने के लिए, अधिशोषित का उपयोग करना बेहतर होता है ताकि उनमें केवल एक विशिष्ट प्रजाति या सूक्ष्मजीव के प्रकार के अनुरूप एंटीबॉडी हों।

प्रतिरक्षा सीरा प्राप्त करने के सिद्धांत.

प्रतिरक्षा सीरम (एंटीसेरम) रक्त सीरम है जिसमें किसी दिए गए एंटीजन के प्रति एंटीबॉडी होते हैं। ज्यादातर मामलों में, माइक्रोबियल, ऊतक और अन्य एंटीजन के प्रति प्रतिरक्षा (नैदानिक) सीरा जानवरों को संबंधित एंटीजन के साथ टीकाकरण करके प्रयोगात्मक रूप से प्राप्त किया जाता है।

एंटीसेरा के लिए मुख्य आवश्यकताओं में उनकी उच्च विशिष्टता और पर्याप्त एंटीबॉडी सामग्री हैं। विशिष्टता के आधार पर, एंटीसेरा को पॉलीवलेंट (बहुविशिष्ट) और मोनोवैलेंट (मोनोस्पेसिफिक) एंटीसेरा के बीच प्रतिष्ठित किया जाता है। पॉलीवैलेंट सीरा में कई एंटीजन के प्रति एंटीबॉडी होते हैं, मोनोस्पेसिफिक - एक विशिष्ट एंटीजन के लिए। आप मोनोस्पेसिफिक सीरम प्राप्त कर सकते हैं:

1) पशुओं का टीकाकरण करने के लिए अत्यधिक शुद्ध एंटीजन का उपयोग करना,

2) अवांछनीय विशिष्टता के एंटीबॉडी से देशी सीरा को शुद्ध करना।

इस उपयोग के लिए:

1) इम्युनोएफ़िनिटी विधि, जो एक ठोस-चरण वाहक पर स्थिर किए गए संबंधित एंटीजन द्वारा एक निश्चित विशिष्टता के एंटीबॉडी के बंधन पर आधारित है, जिसके बाद परिणामी एंटीजन-एबी कॉम्प्लेक्स को अलग किया जाता है और एंटीबॉडी को अलग किया जाता है;

2) कैस्टेलानी सोखना विधि। इस प्रयोजन के लिए, सभी समूह एंटीजन वाले सूक्ष्मजीवों को समूह-विशिष्ट क्रॉस-रिएक्टिंग एंटीबॉडी वाले मूल प्रतिरक्षा सीरम में क्रमिक रूप से जोड़ा जाता है, इस प्रकार समजात एंटीजन को सोख लिया जाता है।

शव. ऐसे अधिशोषित मोनोस्पेसिफिक एंटीसेरा में एंटीजन अणु के विभिन्न निर्धारकों के प्रति एंटीबॉडी होते हैं, जो वर्ग (उपवर्ग) द्वारा विषम होते हैं।

पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया (सीएफआर) यह है कि जब एंटीजन और एंटीबॉडी एक-दूसरे से मेल खाते हैं, तो वे एक प्रतिरक्षा परिसर बनाते हैं जिसमें पूरक (सी) एंटीबॉडी के एफसी टुकड़े के माध्यम से जुड़ा होता है, यानी, पूरक एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स से बंधा होता है। यदि एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स नहीं बनता है, तो पूरक मुक्त रहता है।

एजी और एटी की विशिष्ट अंतःक्रिया पूरक के सोखने (बंधन) के साथ होती है। चूंकि पूरक निर्धारण की प्रक्रिया दृष्टिगत रूप से स्पष्ट नहीं है, इसलिए जे. बोर्डेट और ओ. झांगू ने एक संकेतक के रूप में हेमोलिटिक प्रणाली (भेड़ की लाल रक्त कोशिकाएं + हेमोलिटिक सीरम) का उपयोग करने का प्रस्ताव रखा, जो दर्शाता है कि पूरक एजी-एटी कॉम्प्लेक्स द्वारा तय किया गया है या नहीं। यदि एजी और एटी एक-दूसरे से मेल खाते हैं, यानी एक प्रतिरक्षा कॉम्प्लेक्स का गठन किया गया है, तो पूरक इस कॉम्प्लेक्स से बंधा हुआ है और हेमोलिसिस नहीं होता है। यदि एटी एजी के अनुरूप नहीं है, तो कॉम्प्लेक्स नहीं बनता है और पूरक, मुक्त रहकर, दूसरी प्रणाली के साथ जुड़ जाता है और हेमोलिसिस का कारण बनता है।

प्रतिक्रिया प्रगति

प्रतिक्रिया दो चरणों में होती है जिसमें दो प्रणालियाँ शामिल होती हैं; बैक्टीरियल और हेमोलिटिक. पहली प्रतिक्रिया (विशिष्ट) में एंटीजन 4-+ एंटीबॉडी + पूरक शामिल है। एक सकारात्मक प्रतिक्रिया परिणाम, जो तब होता है जब एंटीबॉडी एक एंटीजन से मेल खाते हैं, सोखने के साथ एक विशिष्ट जीवाणु एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स के गठन की विशेषता होती है, या, जैसा कि वे कहते हैं, "बाध्य" पूरक। अदृश्य रहकर, जटिल कोई कारण नहीं बनता बाहरी परिवर्तनवह वातावरण जिसमें इसका निर्माण हुआ। एक नकारात्मक आरएससी परिणाम एंटीजन और सीरम एंटीबॉडी के बीच विशिष्ट संबंध की अनुपस्थिति में होता है और मुक्त सक्रिय पूरक के संरक्षण की विशेषता है। आरएससी का पहला चरण थर्मोस्टेट में 37°C (1-2 घंटे) पर या रेफ्रिजरेटर में 3-4°C (18-20 घंटे) पर किया जा सकता है। ठंड में एंटीजन-एंटीबॉडी प्रतिरक्षा परिसर के लंबे समय तक गठन के साथ, पूरक का अधिक पूर्ण बंधन होता है और, परिणामस्वरूप, प्रतिक्रिया की संवेदनशीलता बढ़ जाती है। तुलनात्मक प्रयोगों का संचालन करते समय, सोवियत प्रतिरक्षाविज्ञानी शिक्षाविद। वी.आई. इओफ़े और उनके छात्रों ने दिखाया कि ठंड में लंबे समय तक पूरक निर्धारण की स्थिति में, एंटीजन की 100-500 गुना छोटी मात्रा को पकड़ना और प्राप्त करना संभव है सकारात्मक नतीजे 1-2 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर पूरक निर्धारण प्रयोग की तुलना में प्रतिरक्षा सीरम के उच्च तनुकरण पर। प्रतिक्रिया का दूसरा चरण (संकेतक) हेमोलिटिक प्रणाली के अभिकर्मकों (3% निलंबन का मिश्रण) के बीच होता है एरिथ्रोसाइट्स और हेमोलिटिक सीरम समान मात्रा में) 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर केवल पूरक की उपस्थिति में जो प्रतिक्रिया के पहले चरण (नकारात्मक प्रतिक्रिया) से मुक्त रहे। मुक्त सक्रिय पूरक की अनुपस्थिति में, विशिष्ट हेमोलिसिन के प्रभाव में लाल रक्त कोशिकाओं का हेमोलिसिस नहीं होता है (प्रतिक्रिया सकारात्मक होती है)।

अवयव

पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया (सीएफआर) एक जटिल सीरोलॉजिकल प्रतिक्रिया है। इसे पूरा करने के लिए, 5 अवयवों की आवश्यकता होती है, अर्थात्: एजी, एटी और पूरक (पहली प्रणाली), भेड़ एरिथ्रोसाइट्स और हेमोलिटिक सीरम (दूसरी प्रणाली)।

सीएससी के लिए एंटीजन विभिन्न मारे गए सूक्ष्मजीवों, उनके लाइसेट्स, बैक्टीरिया के घटकों, पैथोलॉजिकल रूप से परिवर्तित और सामान्य अंगों, ऊतक लिपिड, वायरस और वायरस युक्त सामग्रियों की संस्कृतियां हो सकती हैं।

ताजा या सूखा मट्ठा पूरक के रूप में उपयोग किया जाता है बलि का बकरा.

प्रतिक्रिया तंत्र

आरएसके दो चरणों में किया जाता है: पहला चरण - तीन घटकों एंटीजन + एंटीबॉडी + पूरक वाले मिश्रण का ऊष्मायन; दूसरा चरण (संकेतक) - भेड़ के एरिथ्रोसाइट्स और उनके प्रति एंटीबॉडी वाले हेमोलिटिक सीरम से युक्त एक हेमोलिटिक प्रणाली को जोड़कर मिश्रण में मुक्त पूरक का पता लगाना। प्रतिक्रिया के पहले चरण में, जब एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स बनता है, पूरक बंधता है, और फिर दूसरे चरण में, एंटीबॉडी द्वारा संवेदनशील एरिथ्रोसाइट्स का हेमोलिसिस नहीं होगा; प्रतिक्रिया सकारात्मक है. यदि एंटीजन और एंटीबॉडी एक दूसरे से मेल नहीं खाते हैं (परीक्षण नमूने में कोई एंटीजन या एंटीबॉडी नहीं है), तो पूरक मुक्त रहता है और दूसरे चरण में एरिथ्रोसाइट - एंटी-एरिथ्रोसाइट एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स में शामिल हो जाएगा, जिससे हेमोलिसिस हो जाएगा; प्रतिक्रिया नकारात्मक है.

आवेदन

पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया का उपयोग इसके लिए किया जा सकता है:
1) ज्ञात प्रकृति के एंटीजन के साथ उनकी बातचीत के आधार पर अज्ञात सीरम में विशिष्ट एंटीबॉडी की पहचान;
2) किसी ज्ञात विशिष्ट सीरम के साथ प्रतिक्रिया में एंटीजन के गुणों का अध्ययन करना। आरएससी के मंचन के लिए सामग्री तैयार करना।

1. अनुसंधान के लिए प्राप्त रक्त सीरम को, प्रतिक्रिया की पूर्व संध्या पर, अपने स्वयं के पूरक को निष्क्रिय करने के लिए पानी के स्नान में 56 डिग्री सेल्सियस पर 30 मिनट तक गर्म किया जाता है। निष्क्रिय सीरम को 3-4°C पर 5-6 दिनों तक संग्रहित किया जा सकता है। प्रयोग के दिन, सीरम को 1:5 के अनुपात में आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल से पतला किया जाता है (परीक्षण सीरम का 0.1 मिली + आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल का 0.4 मिली)।

2. सीएससी के उत्पादन के लिए एंटीजन विभिन्न रोगाणुओं, जीवाणु प्रोटीन और माइक्रोबियल संस्कृतियों से प्राप्त अर्क, पैथोलॉजिकल रूप से परिवर्तित और सामान्य अंगों और ऊतकों की संस्कृतियां हो सकती हैं। एंटीजन तैयारी की विशिष्टताएं संक्रामक प्रक्रिया की प्रकृति और इसके रोगज़नक़ की विशेषताओं से निर्धारित होती हैं।

3. पूरक 3-5 स्वस्थ गिनी सूअरों से प्राप्त सीरम का मिश्रण है, या ampoules में सूखा पूरक है।

उपयोग से तुरंत पहले, स्टॉक समाधान प्राप्त करने के लिए गिनी पिग सीरम को 1:10 के अनुपात में सोडियम क्लोराइड के आइसोटोनिक समाधान के साथ पतला किया जाता है।

4. प्रयोग करने से पहले, हेमोलिटिक सीरम को 30 मिनट के लिए 56 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर गर्म करके निष्क्रिय किया जाता है। मुख्य आरएससी प्रयोग करने के लिए, साथ ही पूरक और एंटीजन को टाइट्रेट करने के लिए, ट्रिपल टिटर में हेमोलिटिक सीरम का उपयोग किया जाता है। उदाहरण के लिए, यदि हेमोलिटिक सीरम का अनुमापांक 1:1800 है, तो प्रतिक्रिया में 1:600 ​​के सीरम तनुकरण का उपयोग किया जाता है।

5. एरिथ्रोसाइट्स डिफाइब्रिनेटेड भेड़ के रक्त से प्राप्त होते हैं। फाइब्रिन फिल्मों को हटाने के लिए, रक्त को तीन-परत धुंध फिल्टर के माध्यम से फ़िल्टर किया जाता है। परिणामस्वरूप निस्पंद को सेंट्रीफ्यूज किया जाता है, सीरम को चूसा जाता है और सूखा दिया जाता है, और एरिथ्रोसाइट्स को आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान के साथ 3-4 बार सेंट्रीफ्यूजेशन द्वारा धोया जाता है। जब लाल रक्त कोशिकाओं को आखिरी बार धोया जाता है, तो तरल की सतह पर तैरने वाली परत पूरी तरह से पारदर्शी होनी चाहिए। आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल में धुली हुई लाल रक्त कोशिकाओं से 3% सस्पेंशन तैयार किया जाता है। उपरोक्त तरीके से आरएससी में शामिल सामग्री तैयार करने के बाद, हेमोलिटिक सीरम, पूरक और एंटीजन के अनुमापन के लिए आगे बढ़ें।

इस प्रतिक्रिया का उपयोग बैक्टीरिया, वायरल, प्रोटोजोअल संक्रमण वाले रोगियों के रक्त सीरम में एंटीबॉडी का पता लगाने के साथ-साथ रोगियों से पृथक वायरस की पहचान और प्रकार करने के लिए किया जाता है।

आरएससी जटिल सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाओं को संदर्भित करता है जिसमें एंटीजन, एंटीबॉडी और पूरक के अलावा, हेमोलिटिक प्रणाली भी भाग लेती है, जिससे प्रतिक्रिया के परिणाम सामने आते हैं। आरएससी दो चरणों में आगे बढ़ता है: पहला पूरक की भागीदारी के साथ एंटीबॉडी के साथ एंटीजन की बातचीत है और दूसरा हेमोलिटिक प्रणाली का उपयोग करके पूरक बंधन की डिग्री की पहचान करना है। इस प्रणाली में भेड़ की लाल रक्त कोशिकाएं और प्रयोगशाला जानवरों को लाल रक्त कोशिकाओं से प्रतिरक्षित करके प्राप्त हेमोलिटिक सीरम शामिल हैं। एरिथ्रोसाइट्स को 30 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर सीरम जोड़कर संसाधित किया जाता है - संवेदनशील बनाया जाता है। संवेदनशील भेड़ एरिथ्रोसाइट्स का विश्लेषण केवल तभी होता है जब वे हेमोलिटिक पूरक प्रणाली में शामिल होते हैं। इसकी अनुपस्थिति में लाल रक्त कोशिकाओं में परिवर्तन नहीं होता है। आरएससी के परिणाम परीक्षण सीरम में एंटीबॉडी की उपस्थिति पर निर्भर करते हैं। यदि सीरम में प्रतिक्रिया में उपयोग किए गए एंटीजन के समरूप एंटीबॉडी होते हैं, तो परिणामी एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स बांधता है और पूरक बांधता है। हेमोलिटिक सिस्टम जोड़ते समय, इस मामले में, हेमोलिसिस नहीं होगा, क्योंकि सभी पूरक एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स के विशिष्ट बंधन पर खर्च किए जाते हैं।

लाल रक्त कोशिकाएं अपरिवर्तित रहती हैं, इसलिए टेस्ट ट्यूब में हेमोलिसिस की अनुपस्थिति को सकारात्मक आरबीसी के रूप में दर्ज किया जाता है। सीरम में एंटीजन के अनुरूप एंटीबॉडी की अनुपस्थिति में, एक विशिष्ट एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स नहीं बनता है और पूरक मुक्त रहता है। जब एक हेमोलिटिक सिस्टम जोड़ा जाता है, तो पूरक इससे जुड़ जाता है और लाल रक्त कोशिकाओं के हेमोलिसिस का कारण बनता है। लाल रक्त कोशिकाओं का विनाश और उनका हेमोलिसिस एक नकारात्मक प्रतिक्रिया की विशेषता है।

आरएससी को चरणबद्ध करने के लिए, निम्नलिखित की आवश्यकता होती है: रोगी का सीरम, पूरक, एक हेमोलिटिक प्रणाली जिसमें भेड़ एरिथ्रोसाइट्स और हेमोलिटिक सीरम, साथ ही एक आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान शामिल है।

प्रतिक्रिया सीरोलॉजिकल ट्यूबों में की जाती है। भेड़ की लाल रक्त कोशिकाओं को डिफाइब्रिनेटेड भेड़ के रक्त को आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान से तीन बार धोकर प्राप्त किया जाता है। हेमोलिटिक सीरम एम्पौल्स में तैयार किया जाता है, जिसका लेबल इसके टिटर को इंगित करता है, यानी, सीरम का अधिकतम पतलापन, जो पूरक की उपस्थिति में लाल रक्त कोशिकाओं में जोड़े जाने पर भी हेमोलिसिस का कारण बनता है। हेमोलिटिक सीरम खरगोश जैसे जानवरों को भेड़ की लाल रक्त कोशिकाओं से प्रतिरक्षित करके प्राप्त किया जाता है। प्रतिक्रिया स्थापित करते समय, सीरम का उपयोग ट्रिपल टिटर में किया जाता है। उदाहरण के लिए, हेमोलिटिक सीरम का अनुमापांक 1:1200 है, और कार्यशील तनुकरण 1:400 है। ताजा गिनी पिग रक्त सीरम (24-48 घंटों के भीतर) या ampoules में सूखा पूरक पूरक के रूप में उपयोग किया जाता है।

आरएससी करने से पहले, पूरक को 1:10 में पतला किया जाता है और अनुमापांक स्थापित करने के लिए अनुमापन किया जाता है - पूरक की सबसे छोटी मात्रा जो इस प्रतिक्रिया में प्रयुक्त हेमोलिटिक प्रणाली के साथ संयुक्त होने पर लाल रक्त कोशिकाओं के हेमोलिसिस द्वारा उत्पन्न होती है। एंटीजन के संभावित पूरक-विरोधी गुणों को ध्यान में रखते हुए, प्रतिक्रिया का मंचन करते समय, पूरक के स्थापित कार्यशील अनुमापांक में 20-30% की वृद्धि की जाती है।

आरएससी के लिए एंटीजन मारे गए जीवाणुओं के निलंबन, इन निलंबन से तैयार अर्क और रोगाणुओं के व्यक्तिगत रासायनिक अंश हैं। एंटीजन के लिए मुख्य आवश्यकता पूरक गतिविधि के निषेध की अनुपस्थिति है। इसमें पूरक-विरोधी गुण नहीं होने चाहिए। एंटीजन के इन गुणों की पहचान करने के लिए, प्रतिक्रिया में प्रयुक्त एंटीजन की उपस्थिति में पूरक को अतिरिक्त रूप से शीर्षक दिया जाता है। आरएससी के मंचन के लिए कुछ योजनाएं हैं। प्रतिक्रिया के परिणामों को हेमोलिटिक प्रणाली में लाल रक्त कोशिकाओं के हेमोलिसिस की उपस्थिति या अनुपस्थिति द्वारा ध्यान में रखा जाता है। आरएससी का उपयोग सिफलिस (वासेरमैन प्रतिक्रिया), गोनोरिया (बोर्डेट-गेंगौ प्रतिक्रिया), टोक्सोप्लाज़मोसिज़, रिकेट्सियल और वायरल रोगों के निदान में किया जाता है।

पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया (सीएफआर)

आरएसके न केवल एजी और एटी की भागीदारी से किया जाता है, बल्कि पूरक की भी भागीदारी के साथ किया जाता है। चूंकि यह दृश्य परिवर्तनों के साथ नहीं है, इसलिए पूरक निर्धारण का पता लगाने के लिए हेमोलिटिक संकेतक प्रणाली का उपयोग किया जाता है। इस प्रणाली में भेड़ एरिथ्रोसाइट्स और खरगोश हेमोलिटिक सीरम शामिल हैं। हेमोलिटिक सीरम में पूरक की उपस्थिति में, लाल रक्त कोशिकाओं का अच्छी तरह से निरीक्षण किया जाता है। विधि का सिद्धांत यह है कि यदि प्रयोग में एजी-एटी कॉम्प्लेक्स बनता है और पूरक उससे जुड़ जाता है (यानी, समाधान में कोई मुक्त पूरक नहीं बचा है), तो लाल रक्त कोशिकाओं का लसीका नहीं होगा, और लाल रक्त कोशिकाएं परखनली के निचले भाग में जमा हो जाएंगी। यदि कॉम्प्लेक्स नहीं बनता है, तो पूरक मुक्त रहता है और हेमोलिटिक प्रणाली के साथ प्रतिक्रिया करता है, जिसके परिणामस्वरूप लाल रक्त कोशिकाएं नष्ट हो जाती हैं। यह तंत्र वासरमैन प्रतिक्रिया (सिफलिस का निदान) को रेखांकित करता है। पूरक प्रणाली की सामान्य गतिविधि तथाकथित हेमोलिटिक प्रणाली में आरएससी द्वारा निर्धारित की जाती है। हेमोलिटिक प्रणाली भेड़ एरिथ्रोसाइट्स और एक मानक विशिष्ट एंटीसेरम का मिश्रण है जिसमें इन एरिथ्रोसाइट्स के लिए एंटीबॉडी होते हैं, लेकिन कृत्रिम रूप से अपने स्वयं के पूरक से वंचित होते हैं। ऐसी प्रणाली में, एटी को एजी से बांधने की प्रक्रिया में एक महत्वपूर्ण लिंक की अनुपस्थिति के कारण एरिथ्रोसाइट्स का हेमोलिसिस नहीं होता है - पूरक, प्रीहीटिंग द्वारा नष्ट हो जाता है। यदि रोगी के सीरम युक्त पूरक को ऐसी प्रणाली में जोड़ा जाता है, तो एक प्रतिरक्षा परिसर बनता है और लाल रक्त कोशिकाएं एक साथ चिपक जाती हैं और हेमोलाइज हो जाती हैं। परीक्षण सीरम में पूरक की सांद्रता जितनी अधिक होगी, एरिथ्रोसाइट्स का हेमोलिसिस उतना ही अधिक स्पष्ट होगा।

सामान्य सीरम पूरक स्तर 20-40 हेमोलिटिक इकाइयाँ हैं। तीव्र संक्रामक के लिए और सूजन संबंधी बीमारियाँएक नियम के रूप में, पूरक गतिविधि में वृद्धि होती है; पुराने मामलों में, यह घट जाती है। हेमोलिटिक गतिविधि के कम मूल्य पूरक प्रणाली के व्यक्तिगत घटकों की जन्मजात या अधिग्रहित कमी को दर्शा सकते हैं। यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि इस प्रणाली में दोष मानव प्रोटीन की सबसे आम वंशानुगत असामान्यताएं मानी जाती हैं। वे बीमारियों और सिंड्रोम में रोगजनक भूमिका निभा सकते हैं जैसे:

• श्वसन प्रणाली, त्वचा और अन्य अंगों के आवर्तक जीवाणु पाइोजेनिक संक्रमण: निमोनिया, ब्रोन्किइक्टेसिस, आवर्तक साइनसाइटिस, पायोडर्मा, सामान्यीकृत जीवाण्विक संक्रमण, सेप्टीसीमिया;
• आवर्तक मेनिंगोकोकल और गोनोकोकल संक्रमण (मेनिंगोकोकल मेनिनजाइटिस, प्रसारित गोनोकोकल संक्रमण, गोनोकोकल गठिया, आदि);
• स्वप्रतिरक्षी, एलर्जी संबंधी बीमारियाँऔर प्रतिरक्षा परिसरों के रोग: प्रणालीगत ल्यूपस एरिथेमेटोसस, डर्माटोमायोसिटिस, मेम्ब्रेनोप्रोलिफेरेटिव ग्लोमेरुलोनेफ्राइटिस, हेनोच-शोनेलिन रोग, स्जोग्रेन सिंड्रोम, थ्रोम्बोसाइटोपेनिक पुरपुरा, स्क्लेरोडर्मा, किशोर रूमेटाइड गठिया, आवर्तक एंजियोएडेमा (विशेष रूप से अक्सर - लैरींगोस्पाज्म), त्वचा रोग, प्रकाश संवेदनशीलता, आदि।

पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया का उपयोग किया जाता है प्रयोगशाला निदानरिकेट्सियोसिस, वायरल संक्रमण (इन्फ्लूएंजा, खसरा, टिक - जनित इन्सेफेलाइटिसआदि) और एजी-एटी कॉम्प्लेक्स से जुड़ने के लिए पूरक की क्षमता पर आधारित है। पूरक को इम्युनोग्लोबुलिन ओ और एम के ईयू टुकड़े पर अधिशोषित किया जाता है। प्रतिक्रिया दो चरणों में होती है। पहला चरण एजी और एटी की परस्पर क्रिया है। परीक्षण सीरम का उपयोग एंटीबॉडी युक्त सामग्री के रूप में किया जाता है, जिसमें एक ज्ञात एंटीजन जोड़ा जाता है। मानक पूरक को इस प्रणाली में जोड़ा जाता है और 1 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया जाता है। दूसरे चरण में एक संकेतक हेमोलिटिक प्रणाली (भेड़ की लाल रक्त कोशिकाओं और खरगोश के हेमोलिटिक सीरम जिसमें भेड़ की लाल रक्त कोशिकाओं के लिए हेमोलिसिन होता है) का उपयोग करके प्रतिक्रिया के परिणामों की पहचान करना है। . एजी-एटी-पूरक मिश्रण (चरण 1) में एक संकेतक प्रणाली जोड़ी जाती है और फिर से 30-60 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया जाता है, जिसके बाद प्रतिक्रिया परिणामों का आकलन किया जाता है। लाल रक्त कोशिकाओं का विनाश तब होता है जब वे हेमोलिटिक पूरक प्रणाली में शामिल हो जाते हैं। यदि पूरक को पहले एजी-एटी कॉम्प्लेक्स पर अधिशोषित किया गया था, तो एरिथ्रोसाइट्स का हेमोलिसिस नहीं होता है। हेमोलिसिस तब होता है जब परीक्षण सीरम में नैदानिक ​​​​उच्च रक्तचाप के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी होते हैं। परीक्षण सीरम में विशिष्ट एंटीबॉडी की अनुपस्थिति में, एंटीजन-एबी कॉम्प्लेक्स नहीं बनता है, और पूरक अनबाउंड रहता है। जब एक हेमोलिटिक सिस्टम जोड़ा जाता है, तो पूरक इससे जुड़ जाता है और लाल रक्त कोशिकाओं का हेमोलिसिस होता है। आरएससी की तीव्रता का आकलन हेमोलिसिस विलंब की डिग्री और लाल रक्त कोशिका तलछट की उपस्थिति के आधार पर चार-क्रॉस प्रणाली का उपयोग करके किया जाता है। परीक्षण सीरम को छोड़कर, आरएससी के सभी घटकों का शीर्षक दिया जाना चाहिए (चित्र 10.9)।

चावल। 10.9.ए- पूरक की उपस्थिति में संवेदनशील एरिथ्रोसाइट्स का विश्लेषण: बी - एजी-एटी कॉम्प्लेक्स द्वारा पूरक निर्धारण के कारण हेमोलिसिस की अनुपस्थिति; वी- एजी-एटी कॉम्प्लेक्स की अनुपस्थिति के परिणामस्वरूप एरिथ्रोसाइट्स का विश्लेषण

आरएससी का व्यापक रूप से यौन संचारित रोगों, रिकेट्सियोसिस और वायरल संक्रमण के प्रयोगशाला निदान के लिए उपयोग किया जाता है। प्रतिक्रिया दो चरणों में होती है। पहला चरण- पूरक की अनिवार्य भागीदारी के साथ एंटीजन और एंटीबॉडी की परस्पर क्रिया। दूसरा- एक संकेतक हेमोलिटिक प्रणाली (भेड़ लाल रक्त कोशिकाओं और हेमोलिटिक सीरम) का उपयोग करके प्रतिक्रिया परिणामों की पहचान। हेमोलिटिक सीरम द्वारा लाल रक्त कोशिकाओं का विनाश केवल तभी होता है जब हेमोलिटिक प्रणाली में पूरक जोड़ा जाता है। यदि पूरक को पहले एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स पर अधिशोषित किया गया था, तो एरिथ्रोसाइट्स का हेमोलिसिस नहीं होता है। यदि परीक्षण सीरम में एंटीबॉडी हैं, एंटीजन का पूरक, परिणामी एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स स्वयं को पूरक बनाता है (एडसोर्ब्स)। हेमोलिटिक प्रणाली जोड़ते समय कोई हेमोलिसिस नहीं होता है (विलंबित हेमोलिसिस ) , क्योंकि सभी पूरक एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स के विशिष्ट बंधन पर खर्च किए जाते हैं, और लाल रक्त कोशिकाएं अपरिवर्तित रहती हैं। सीरम में एंटीबॉडी की अनुपस्थिति में, एंटीजन के पूरक, एक विशिष्ट एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स नहीं बनता है और पूरक अनबाउंड रहता है। इसलिए, जब एक हेमोलिटिक प्रणाली जोड़ी जाती है, तो पूरक उससे जुड़ जाता है। इस मामले में प्रतिक्रिया का परिणाम होगा hemolysis एरिथ्रोसाइट्स - तथाकथित "वार्निश" रक्त टेस्ट ट्यूब में बनता है।

चावल। 6. आरएसके योजना: ए- संकेतक प्रणाली (भेड़ की लाल रक्त कोशिकाएं और उनके प्रति एंटीबॉडी) पूरक की उपस्थिति में हेमोलिसिस के रूप में निर्धारित होती है; बी- डायग्नोस्टिकम (एजी) रोगी के सीरम के साथ प्रतिरक्षा परिसरों का निर्माण करता है और पूरक को सक्रिय करता है, जिसके परिणामस्वरूप हेमोलिसिस में देरी होती है; वी- एक स्वस्थ व्यक्ति के सीरम में कोई एंटीबॉडी नहीं होती है, पूरक संकेतक प्रणाली द्वारा सक्रिय होता है, परिणाम हेमोलिसिस होता है।

एट और एजी लेबल का उपयोग कर प्रतिक्रियाएं

लेबल किए गए एंटीबॉडी और एंटीजन का उपयोग करने वाली प्रतिक्रियाएं संक्रामक रोगों के तेजी से निदान के तरीकों का आधार बनती हैं, क्योंकि वे परीक्षण नमूनों में एजी और एबी की न्यूनतम सामग्री का पता लगाते हैं। विभिन्न एंजाइमों, फ्लोरोक्रोम रंगों और आइसोटोप का उपयोग लेबल के रूप में किया जा सकता है।

इम्यूनोफ्लोरेसेंस प्रतिक्रिया (आरआईएफ) यह विधि स्पष्ट एवं अत्यधिक संवेदनशील है। इसकी दो किस्में हैं. पर प्रत्यक्षइस विधि में, कांच पर लगे रोगाणुओं के परीक्षण निलंबन में फ्लोरोक्रोम-लेबल सीरम मिलाया जाता है। पराबैंगनी (नीली-बैंगनी) किरणों से प्रकाशित होने पर परिणामी एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स देता है चमकदार हरी चमक. पर अप्रत्यक्षआरआईएफ किसी भी प्रकार के सूक्ष्म जीव के खिलाफ पारंपरिक डायग्नोस्टिक सीरा का उपयोग करता है। परीक्षण माइक्रोबियल सस्पेंशन में इस सीरम को जोड़ने से एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स का निर्माण होता है। इस कॉम्प्लेक्स का पता एक सार्वभौमिक फ्लोरोसेंट सीरम का उपयोग करके लगाया जाता है जिसमें पशु प्रजातियों के रक्त के गैमाग्लोबुलिन अंश के एंटीबॉडी होते हैं जिनसे डायग्नोस्टिक सीरम प्राप्त किया गया था। चमकदार परिसर का पता प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी द्वारा लगाया जाता है।

चावल। 7. इम्यूनोफ्लोरेसेंस प्रतिक्रिया (योजना)।

एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परख (एलिसा) एंजाइम इम्यूनोएसे एंटीजन और एंटीबॉडी की ज्ञात प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया पर आधारित है। इन अभिकर्मकों में से एक विश्लेषक है, और दूसरा एक मान्यता अभिकर्मक है, जिसमें विश्लेषक के संबंध में एक ज्ञात मानक विशिष्टता (चयनात्मकता) है। निर्मित प्रतिरक्षा परिसरों (एंटीजन-एंटीबॉडी) की पहचान करने के लिए इसका उपयोग किया जाता है एंजाइम, जो प्रारंभिक रूप से पहचान घटक (एंटीजन या एंटीबॉडी) को लेबल करता है। एंजाइम स्वयं, स्वाभाविक रूप से, दिखाई नहीं देता है, इसलिए एलिसा द्वारा निर्धारित पदार्थ की उपस्थिति का दृश्य एक मध्यस्थ का उपयोग करके प्राप्त किया जाता है - वर्णकोत्पादक. यह एक विशेष रासायनिक यौगिक है जो पानी में अत्यधिक घुलनशील होता है और घोल रंगहीन होता है। रंगहीन क्रोमोजेन का रूपांतरण रंगीन पदार्थ क्रोमोफोरयह एक एंजाइम की क्रिया के तहत होता है जिसके लिए क्रोमोजेन एक सब्सट्रेट है।

चावल। 8. एंजाइम इम्यूनोएसे (योजना)।

स्वप्रतिजन- ऐसे पदार्थ जिनमें उत्पन्न करने की क्षमता होती है प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाएंजिस शरीर से उन्हें प्राप्त किया जाता है। उनमें मस्तिष्क, आंख का लेंस, शुक्राणु, पैराथाइरॉइड ग्रंथियां, वीर्य ग्रंथि के समरूप, त्वचा, गुर्दे, यकृत और अन्य ऊतक होते हैं। चूंकि सामान्य परिस्थितियों में ऑटोएंटीजन संपर्क में नहीं आते हैं प्रतिरक्षा प्रणालीशरीर में ऐसी कोशिकाओं और ऊतकों में एंटीबॉडी नहीं बनती हैं। हालाँकि, जब ये ऊतक क्षतिग्रस्त हो जाते हैं, तो ऑटोएंटीजन अवशोषित हो सकते हैं और एंटीबॉडी के निर्माण का कारण बन सकते हैं जो संबंधित कोशिकाओं पर हानिकारक प्रभाव डालते हैं। शीतलन, दवा के संपर्क, वायरल संक्रमण, जीवाणु प्रोटीन और विषाक्त पदार्थों, जैसे स्ट्रेप्टोकोकी, स्टेफिलोकोसी, माइकोबैक्टीरियम ट्यूबरकुलोसिस और अन्य कारकों के प्रभाव में कुछ अंगों और ऊतकों की कोशिकाओं से ऑटोएंटीजन भी उत्पन्न हो सकते हैं। वे इस मामले में शरीर के स्वयं के एंटीजन की प्रजाति विशिष्टता के उल्लंघन के कारण बनते हैं।

एंटीबॉडीज़, जटिल ग्लाइकोप्रोटीन अणु होने के कारण स्वयं एंटीजन भी होते हैं। उनकी संरचना में, तीन प्रकार के एंटीजेनिक निर्धारक (एलीटटाइप) प्रतिष्ठित हैं: आइसोटाइप, एलोटाइप और इडियोटाइप।

आइसोटाइप निर्धारक हैं जो भारी श्रृंखलाओं के वर्गों और उपवर्गों और कप्पा और लैम्ब्डा प्रकाश श्रृंखलाओं के प्रकारों को अलग करते हैं।

एलोटाइप किसी दिए गए इम्युनोग्लोबुलिन जीन के एलील्स द्वारा एन्कोड किए गए निर्धारक हैं।

इडियोटाइप एंटीबॉडी अणुओं के सक्रिय केंद्रों द्वारा गठित एंटीजेनिक निर्धारक हैं।

आईजीजी वर्ग मानव सीरम में सभी इम्युनोग्लोबुलिन की कुल मात्रा का लगभग 75% है।